• Tel: 0318 357 42 42
  • E-Posta: Bu e-Posta adresi istenmeyen posta engelleyicileri tarafından korunuyor. Görüntülemek için JavaScript etkinleştirilmelidir.

 

Flow Sitometri ve Kullanım Alanları

01. Giris

Flow sitometri, hucre veya partikullerin akmakta olan bir akıskanın icindeyken karakteristiklerinin olculmesidir. Akım sitometrisi ile bir suspansiyon halindeki hucre ya da partikuller, lazer ısığı ile aydınlatılmakta olan bir bolmeden gecirilir; hucrelerin ısığın onunden gecerken verdikleri sinyaller toplanarak analiz edilir. Olusan sinyallerin kaynağı, hucrenin buyukluk, granularite gibi fiziksel ozellikleri olabildiği gibi; hucreye bağlanan cesitli fluorokromlar da olabilir. Boylece hucre ya da partikulun immunfenotipi, DNA iceriği, enzim aktiviteleri, hucre membran potansiyeli, canlılığı gibi cesitli ozellikleri hakkında bilgi toplanabilir (1) Flow sitometrilerin fluorosen olmayanları tam kan hucresi sayımları icin klinik laboratuarlarda kullanılır. Daha cok yonlu arastırmalar icin fluorosen olanları kullanılır. Bunlara sitofluorometre denir. Flow sitometriler bircok biyolojik arastırma enstitusunde ve tıp merkezlerinde bulunur. Bunlardan dunyada yaklasık 7 bin tane vardır. Tıp merkezlerinde arastırmanın yanında tanı icin de kullanılır. Ayrıca kanserli hucre tanısında ve AIDS hastalarının kanında CD4 lenfosit seviyesinin izlenmesinde de kullanılır (2).

02. Flow Sitometrinin Çalısma Prensibi

Her bir hucre veya partikul lazer demetinin icinden gecerken saptırılan lazer ısığı ve hucreler tarafından yayınlanan fluorosen ısığı bir araya getirilip, optik filtreler ve aynalar tarafından farklı dalga boylarına gore ayrılarak, analog sinyallere donusturulurler. Bu sinyaller dijitallestirilerek, histogramlar olarak ekrana aktarılır. Histogram, olculen parametrelerin frekans dağılımlarının gorsel sunumudur (1). Olcum sırasında hucreler canlı veya sabit olmalıdır, ayrıca sıvı icinde hucreler tek tek askıda olmalıdır. Hucreleri iceren suspansiyon surekli bir akısla lazer ısını icinden gecmelidir. Her bir hucre lazer ısığının bir kısmını saptırır ve aynı zamanda lazer tarafından uyarıldıklarından yani ekstra enerji yuklenmis olduğundan, fluorosen ısığı yayarlar (2).

Sitometri her bir hucre icin aynı anda bircok parametre olcer:

-Hucre capı ile yaklasık orantılı olarak dusuk acıda ileri sacılma yoğunluğu

-Hucre icindeki granul yapı sayısı ile yaklasık orantılı olarak ortogonal (90°) sacılma yoğunluğu

-Bircok dalga boyundaki fluoresen yoğunluğu

Fluorosen yoğunluğu her bir hucre icin es zamanlı olarak bircok farklı dalga boylarında olculur. Fluorosen propları hucrelerin spesifik bilesenlerinin sayılarını rapor etmek icin kullanılır. Fluorosen antikorlar daha cok spesifik yuzey reseptorleri yoğunluklarının rapor edilmesinde kullanılır ve boylece gecis genleri ifade eden hucreler de dahil olmak uzere farklılasmıs hucre tiplerinin alt populasyonları da belirlenir. Bunlar fluorosen hale getirilerek, viruslerin veya hormonların yuzey reseptorleri ile bağı olculebilir. Hucreler arası bilesenler ile toplam DNA/ hucre (hucre cevrimleri analizlerine izin verecek sekilde), yeni sentez edilmis DNA, DNA veya mRNA olusturan ozel nukleotid flamentoz aktin ve antikor elde edilebilecek herhangi bir yapıyı kapsayacak sekilde fluorosen proplar ile veriler toplanabilir (2).

Flow sitometri aynı zamanda hucreler arası serbest kalsiyum, zar potansiyeli, pH veya serbest yağ asitlerindeki hızlı değisiklikleri de izleyebilir (2). Flow sitometriler; akıskanlar, lazer optikler, elektronik dedektorler, analog dijital cevrimciler ve bilgisayarları icerir. Optik kısım lazer ısığı yayar ve ısını birkac hucre capının olusturduğu demet uzerine odaklar (2).